Obtenção de metabólitos secundários: Extração

Os microrganismos são crescidos em meios de cultura líquida, específicos para cada classe de microrganismo, sob agitação e incubados por tempo variável, dependendo se são fungos, bactérias ou actinomicetos. O filtrado obtido é centrifugado e a partir do filtrado livre de células proceder-se-á ao processo de extração com solventes orgânicos de polaridades diversas. Esta metodologia consiste na separação das fases aquosas e orgânicas. A escolha do solvente é governada pelo coeficiente de partição do metabólito entre o solvente e o caldo de cultura, e pela miscibilidade do solvente com o caldo.

Após isso, proceder-se-á a evaporação do solvente em rotavapor sob pressão reduzida e análise do extrato bruto por cromatografia em camada fina. Após observação das frações sob luz ultravioleta, proceder-se-á à remoção das frações do adsorvente (sílica), que serão colocadas em "eppendorf" e dissolvidas com solvente. As diferentes frações serão testadas individualmente, usando-se discos de papel de filtro contra um fungo e/ou uma bactéria para avaliar a sensibilidade destes às frações.

Das frações com atividade biológica, assim determinadas pelos testes in vitro e identificada pelo Rf nas placas cromatográficas, proceder-se-á à identificação química.